什么是PCR?
聚合酶链式反应(PCR),有时也称“分子复印(molecular photocopying)”,是一种快速且低成本的技术,用于扩增/复制DNA的小片段。由于分子和遗传分析需要大量的DNA样本,因此如果不进行PCR扩增,几乎不可能对分离的DNA片段进行研究。PCR通常被誉为分子生物学最重要的科学进展之一,它在一定程度上革新了DNA研究。
PCR可以应用在哪些地方?
扩增之后,PCR产生的DNA可用于许多不同实验室程序。例如,Human Genome Project(HGP)中大多数作图技术都依赖于PCR。同时PCR在许多实验室和临床技术中也很有价值,包括DNA指纹图谱、细菌或病毒(尤其如AIDS)的检测以及遗传疾病的诊断等。
PCR是如何进行的?
为采用PCR方法扩增DNA片段,需要:
加热Sample,使DNA变性或分离成两条单链DNA;
一种称为“Taq聚合酶(Taq polymerase)”的酶以原始链为模板,合成—构建—DNA的两条新链;
这个过程使原始DNA复制,每个新分子都包含一条旧的DNA链和一条新的DNA链。然后,这些链中的每一个都可以用于创建两个新副本,以此类推。变性和合成新DNA的循环重复多达30至40次,使得超过10亿个原始DNA片段的精确复制。
PCR的整个循环过程是自动化的,仅需几个小时即可完成。 整个过程通过热循环仪完成,该仪器被设置为每隔几分钟改变反应温度以促使DNA的变性和合成。
介绍了这么多,SnapGene有哪些功能可以帮我进行PCR呢?
当然可以!SnapGene支持自动引物设计,模拟真实PCR过程。
模拟PCR - 操作步骤
01打开PCR对话框
点击菜单栏[Actions] → [PCR]
02 指定引物
如果事先未指定引物,要先选择要扩增的区域,然后单击“选择PCR引物...(Choose PCR Primers)”。如果已经选择了要扩增的区域,会自动出现选择PCR引物的对话框。
输入希望的Tm值,然后点击[Choose Primers]。
03选择PCR引物
在“ PCR”对话框中,查看引物名称和磷酸化状态。
04 选择聚合酶
使用聚合酶:菜单选择扩增片段的末端类型。
05命名生成产物
准备好模拟PCR时,键入产物名称,然后单击[PCR]。
06查看生成产物
产物将显示在新窗口中。有关使用SnapGene将扩增的片段克隆到载体中的信息,可以参考“插入片段(Insert Fragment)”课程。
07确定PCR扩增序列
要指定PCR扩增的序列,单击以选择正向引物,然后按住Shift单击以选择反向引物和中间序列。有关创建或编辑引物的更多信息,可以参考“创建引物”课程。或者,在打开PCR对话框之前或之后,选择要扩增的区域。然后,SnapGene将自动选择引物。
08查看PCR历史记录
要查看产品历史记录,直接切换到“历史记录”视图即可。通过单击引物名称获得PCR引物及其序列的列表。然后可以将引物序列复制并粘贴到文本文件中。